Titre : | ADAPTATION DES METHODES DE CRYOCONSERVATION AU SPERME DE PINTADE, 1 |
Auteurs : | SAMUEL ALAIN |
Type de document : | Thèse-Mémoire |
Editeur : | BEAUVAIS : ISAB, 2002 |
Format : | 76 P. + ANNEXES |
Langues: | Français |
Concepts : |
PINTADE
SPERME SPERMATOZOIDE CRYOCONSERVATION MEMBRANE PERMEABILITE |
Résumé : | En juillet 2001, le SYSAAF et la SRA se sont vus attribuer par le CIP un programme de recherche sur la cryoconservation du sperme de pintade. Le SYSAAF prend en charge l'adaptation des techniques au sperme de pintade alors que la SRA doit se focaliser sur des aspects fondamentaux : analyse qualitative du sperme de pintade avant et après congélation et mécanismes de conservation maintenant l'intégrité fonctionnelle du sperme. Ce mémoire s'inscrit tout d'abord dans la première phase du programme. En effet l'objectif principal est d'obtenir rapidement une fertilité de l'ordre de 40% à partir des techniques de cryoconservation connues. En lien avec la SRA, il doit également permettre d'initier les recherches de la seconde phase afin de caractériser les spermatozoïdes de pintade par l'étude des altérations de perméabilité membranaire plasmique. Après un recensement bibliographique des composantes techniques de la cryoconservation du sperme, les expérimentations in vitro ont débuté. L'objectif était d'atteindre un pourcentage maximum de spermatozoïdes vivants normaux après décongélation mesuré par comptage en microscopie optique de frottis colorés à l'éosine nigrosine. Les travaux se sont tout d'abord basés sur une technique simple alliant le DMA et une vitesse de congélation très rapide sous forme de microbilles (Tselutin et al., 1995). Son manque de résultats a réorienté les recherches vers une méthode combinant un cryoprotecteur moins toxique, le DMF , et une vitesse de congélation plus lente (Schramm, 1989). A partir de cette base, le dilueur (IGGKPh, Voronina et al., 1986), la concentration finale (1,5 milliards de spermatozoïdes par ml), les paramètres d'apport du cryoprotecteur (6% en mélange avec du dilueur et 5 minutes d'équilibration), le conditionnement du sperme (paillette 0,5 ml) et la vitesse de congélation (- 15°C/min) et de décongélation (bain marie à 50°C pendant 8 secondes) ont pu être fixés. Même avec des mâles âgés de 56 semaines, les résultats atteints sont intéressants et répétés : 26,4% de spermatozoïdes vivants normaux après décongélation soit un taux de survie de 45% par rapport au nombre de spermatozoïdes vivants normaux avant congélation. Le passage aux tests in vivo révèle un manque de corrélation avec les résultats observés en in vitro. En effet les taux de fertilité après mirage à 8 jours sont décevants puisque dans le meilleur de cas ils n'atteignent qu'une vingtaine de pourcents. Des composantes et des assemblages de techniques de congélation restent donc à tester. L'amélioration de la survie dans le temps des spermatozoïdes après la décongélation et la sélection des mâles sur la résistance de leur semence à la cryoconservation sont des axes prioritaires de recherche. En ce sens, la résistance aux chocs osmotiques des membranes plasmiques des spermatozoïdes de pintade a été testée. Ces tests ont conduit à l'élaboration d'un protocole basé sur la cytométrie de flux et la double coloration SYBR 14 / Iodure de Propidium. Il pourrait rapidement constituer la base d'un test d'aptitude du sperme à la congélation. A plus long terme, il vise la mise en place et l'évaluation de méthodes de protection de la membrane. |
Exemplaires (1)
Cote | Support | Section | Disponibilité |
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MEM 1736 | Texte imprimé | Réserve | Exclu du prêt |